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培養(yǎng)箱架構:為您的細胞構建舒適的家

二氧化碳培養(yǎng)箱一直是組織培養(yǎng)實驗室的支柱,比大多數(shù)研究人員的專業(yè)壽命更長。這些可靠的工作委托不僅包括大多數(shù)基于細胞的實驗的常規(guī)初始起始材料,而且通常是非常寶貴的實驗樣品,使科學家能夠發(fā)現(xiàn)研究中令人興奮的新細胞突破。在這里,我們將討論為實驗室選擇新培養(yǎng)箱時要考慮的一些關鍵特性。

干或濕溶液?

傳統(tǒng)的二氧化碳培養(yǎng)箱是一個盒子被裝滿水的城墻包圍,這種技術仍然占大多數(shù)當今實驗室中孵化。

“從歷史上看,人們獲得水夾套培養(yǎng)箱的原因之一是溫度均勻性從一側到另一側,從上到下,非常好,”賽默飛世爾科技**全球細胞培養(yǎng)**Mary Kay Bates說。水的**熱質量使培養(yǎng)箱能夠比干燥的培養(yǎng)箱保持其溫度更長,也許更均勻,對于任何容易停電的實驗室而言,它還有助于抑制任何振動。

但采取傳統(tǒng)方法可能有其缺點。厚壁增加了培養(yǎng)箱的足跡,可以擠壓其內部尺寸。水套式培養(yǎng)箱可能需要一整天才能達到穩(wěn)定的工作溫度。它們很重,需要在移動之前排干。他們需要維護。有些可能會泄漏。奧克蘭研究院兒童醫(yī)院的科學家David Killilea說,如果你在水套內受到污染,他們“真的很痛苦” 。Killilea創(chuàng)建并管理了一個學術核心設施。

干式夾套培養(yǎng)箱已經(jīng)存在了一段時間,但它們“不那么穩(wěn)定,并且存在一些加熱不規(guī)則 - 培養(yǎng)箱的溫暖部分和較冷的部分,”Killilea回憶道。他說這些問題已于2001年左右制定出來,當時他購買了四臺三洋培養(yǎng)箱,這些培養(yǎng)箱使用空氣夾套和直接加熱來包裹腔室。他說,他向許多同事推薦了這個培養(yǎng)箱,并且**近還購買了另外兩個(現(xiàn)在的松下品牌)更新型號。

大多數(shù)培養(yǎng)箱出售今天采用直接加熱和/或空氣夾克技術麗貝卡·高利諾,產品經(jīng)理,CO說,2培養(yǎng)箱,在微量離心北美。許多,如果不是大多數(shù),主要的CO2培養(yǎng)箱供應商制造的干套模型,有的(如Eppendorf)中甚**不再提供水套的版本。

保持衛(wèi)生

對于許多用戶來說,避免污染的傳播可能是培養(yǎng)箱的**高優(yōu)先級(而且供應商熱衷于宣傳這一點作為創(chuàng)新點)。華盛頓大學轉基因資源項目的項目經(jīng)理羅伯特·亨特 **近為他的核心購買了一對堆疊的Thermo Scientific Heracell培養(yǎng)箱。因為核心經(jīng)常從外部來源進入細胞,他說,“我真的對銅襯里培養(yǎng)箱感興趣,只是為了控制真菌和孢子以及這些類型的東西 - 以及高溫去污系統(tǒng)。”

銅內飾并非都是平等的。有些像Heracell一樣是100%純銅。其他產品,如Thermo Scientific的Forma系列,配備不銹鋼內飾,可選擇銅架和組件。像松下這樣的其他公司提供注入銅的不銹鋼--Killilea說,它解決了銅銹(變色)和純銅銅粉的問題。瓜里諾指出,美G環(huán)境保護署已經(jīng)制定了表面**低銅百分比的標準,以使其具有抗菌功效。

高熱去污是使整個腔室達到并保持特定溫度一段給定時間的過程。

此選項僅適用于干式夾套(非水夾套)培養(yǎng)箱。該方法可以使用通常不超過95℃的濕熱,或干熱,其可以高達200℃。在某些型號中,必須在開始凈化循環(huán)之前去除某些可能被熱損壞的組件。

Killilea的新培養(yǎng)箱配備了快速,低溫的過氧化氫蒸汽凈化系統(tǒng)。內置的紫外線燈隱藏在管道系統(tǒng)后面,因此它不會直接影響電池 - 然后導致蒸汽分解成水和氧氣。紫外線燈還可以凈化全天循環(huán)的空氣。

其他設計特征也可以在限制污染方面發(fā)揮作用。例如,具有圓角的無縫內部可以限制微生物可以收集的區(qū)域,并且HEPA過濾器防止來自常規(guī)氣流的污染。當培養(yǎng)箱門打開時,正壓可以幫助防止未經(jīng)過濾的實驗室空氣進入腔室。

常識和良好的無菌技術仍然是重要的做法。加州大學伯克利分校的設施監(jiān)督員之一Alison Killilea表示,她的核心主要使用四個非常古老的Heraeus培養(yǎng)箱:“我認為它們是在80年代或90年代初購買的。”她評論說培養(yǎng)箱沒有水鍋。“你實際上將水直接倒入培養(yǎng)箱中,因為整個過程都是銅襯里的。”雖然沒有去污循環(huán),但實驗室經(jīng)歷的污染很少。“我們只專注于擁有非常好的技術,所以我們不必使用其中一些備用東西,”她說。

它在空中

能夠在整個室內保持均勻的溫度,高濕度以**小化蒸發(fā),以及一致的CO 2水平以使培養(yǎng)基保持適當?shù)膒H,這是CO2培養(yǎng)箱的標志。

然而,試圖證明不同干式夾克技術在實現(xiàn)這些目標方面的差異和好處可能就像玩他/她說的那樣。

盡管線條有些模糊,但直接加熱系統(tǒng)使用與腔室接觸的加熱電纜,通常被某種類型的jue緣體包圍,以保持溫度。空氣夾套系統(tǒng)加熱腔室周圍的空氣。一些制造商提供混合系統(tǒng),并且**少有一家制造商(Caron)用保溫凝膠圍繞其腔室。

BMT的直接加熱系統(tǒng)有三個獨立的加熱回路 - 一個用于門,一個用于側面,一個用于腔室底部。“它們的加熱速度略有不同,因此我們能夠創(chuàng)造自然對流,”該公司科學事業(yè)部業(yè)務部經(jīng)理Rick Ellison解釋道。“不僅直接加熱設計允許我們移除風扇,而且[它]允許我們將冷凝物吸入其所屬的腔室底部,”通過創(chuàng)建冷卻點 - 同時保持腔室的每個位置都在設定點為0.1°C**0.25°C。

與此同時,Bates頌揚“循環(huán)風扇的優(yōu)點,即在整個腔室內形成均勻的環(huán)境,并確保所有條件(CO 2,溫度和濕度)的快速恢復。在我們的Thermo ScientificTM Heracell™VIOS CO2培養(yǎng)箱中,我們**的Thermo Scientific TM THRIVE TM主動氣流設計可在10分鐘或更短的時間內從標準的30秒開門處恢復。“

在大多數(shù)單元中,從腔室底部的盤中蒸發(fā)的水使腔室保持濕潤。對于濕度控制**關重要的應用,一些培養(yǎng)箱監(jiān)測濕度并用來自外部水庫的蒸汽補充它。貝茨說,后者通常在GMP生產環(huán)境中更受歡迎。

缺氧

隨著人們從培養(yǎng)耐寒細胞系轉向培養(yǎng)原代細胞,干細胞甚**3D培養(yǎng)物,能夠控制O 2水平以及更好地模擬體內環(huán)境中的缺氧變得越來越重要。許多廠商現(xiàn)在提供CO 2,其中低氧環(huán)境中通過引入氮氣創(chuàng)建孵化。例如,Eppendorf提供兩種選擇:0.1%**19%,或1%**19%,O 2控制。

還有培養(yǎng)箱可以產生高氧條件。“他們不太受歡迎 - 更多的利基應用,”貝茨說。“有時人們會用它來研究視網(wǎng)膜細胞或肺部疾病,或者[觀察]反應性O 2物種。”

Xcell Biosciences的小型(3.7升)Avatar系統(tǒng)進一步實現(xiàn)了大氣控制:“我們能夠模擬從循環(huán)到骨髓到大腦內發(fā)現(xiàn)的液體的各種壓力條件,”**科學官James Lim說。

此外......

不是所有的設備可以處理高的CO 2和濕度。一些制造商特別推薦用于培養(yǎng)箱的制造商,其中一些在腔室外部具有控制裝置。的Eppendorf提供臺式CO2培養(yǎng)箱內置振動篩。(也有在市場上搖動器具有內置的CO 2控制時,實現(xiàn)“從相反的方向類似的**終結果”,筆記利諾。)類似地,龍沙公司CytoSMART™  和Essen的生物科學的IncuCyte®  實時成像系統(tǒng)被設計成被容納在培養(yǎng)箱中。

這些天來,這是不難發(fā)現(xiàn)的CO 2孵化各種尺寸的觸摸屏控制,數(shù)據(jù)記錄和以太網(wǎng)連接,外的參數(shù)報警,可逆門鉸鏈,多個室內玻璃門(特別是為O 2個 -controlled單位) ,密碼保護的參數(shù)和門鎖,甚**冷卻和加熱腔室的能力。無論滿足您實驗室的需求,它都可能在那里。記住要始終練習良好的無菌程序,并且沒有任何替代常識。

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